1.培养法

培养法是通过将待检测样品先接种到支原体液体培养基中大量繁殖，然后再转接种到支原体固体培养基中，培养一段时间后（大约一个月），如果固体培养中出现典型的支原体菌落，则说明待测样品有支原体污染。
 

 

2、RD-RCA 恒温法（MycoBlue Mycoplasma Detector）

吸取 1 ul 细胞培养上清液加入到反应体系中，孵育 1 小时，若细胞培养物被支原体污染，支原体 DNA 保守系列会被等温 DNA 聚合酶特异性扩增，使得反应液由紫色变成天蓝色。肉眼可观察。
 

该方法主要是能与 DNA 特异性结合的荧光染料 Hoechst33342 或 Hoechst33258，可使支原体内 DNA 着色，染色后可用荧光显微镜观察。

 

4.酶活法（TransDetect Luciferase Mycoplasma Detection Kit）

支原体溶解时释放出来的酶与 TransDetect Luciferase Mycoplasma Detection Kit 中提供的底物发生催化反应，将 ADP 转化成 ATP，而 ATP 含量的上升，能通过生物发光化学反应检测，并通过分光光度计进行读数，从而达到检测支原体的目的。
 

5. PCR 法（Genloci-Mycoplasma Detection Kit）

利用对支原体基因组中保守的编码域序列进行 PCR 检测的方法来进行支原体检测的。

美德华生的 Mycoplasma Detection Kit （支原体检测试剂盒）能够快速、准确地检测细胞培养中的支原体污染。试剂盒中的 Primers 是依据支原体基因组中高度保守法人 16SrRNA 编码域而设计的，只需简单的 PCR 反应就可检测 M.Arginini, M.Fermentans, M.Hyorhinis, M.Orale, M.Salivarium, M. Hominis, M.Pneumonia 等常见的支原体。多年市场验证准确度和灵敏度。

 

除此之外还有相差显微镜法和电镜扫描法，不过，因其限制因素较大，在此不进行说明。
上述内容简单介绍了各种检测方法的原理，下面总结一下优缺点：

最后，单独使用目前市场上任何一种支原体检测试剂盒，都无法做到 100% 准确。严格的支原体检测，应至少使用二种及以上检验方法来确定检验准确性。